Assay of <TEX>$\beta$</TEX>-Galactosidase Using High Performance Liquid Chromatography

Shin, Myung Gon; 신명곤; Chang, Pahn Shick; 장판식; Min, Bong Kee; 민봉기; Kim, Sun Chang; 김선창

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P-ISSN1225-0163
E-ISSN2288-8985
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E-ISSN 2288-8985

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5권 4호

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고속액체크로마토그래피를 이용한 유당분해효소의 활성도 측정

Assay of $\beta$-Galactosidase Using High Performance Liquid Chromatography

분석과학 / Analytical Science and Technology, (P)1225-0163; (E)2288-8985

1992, v.5 no.4, pp.465-469

신명곤
장판식
민봉기
김선창

신명곤, 장판식, 민봉기, & 김선창. (1992). 고속액체크로마토그래피를 이용한 유당분해효소의 활성도 측정. , 5(4), 465-469.

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초록

유당분해효소의 활성도를 정량하기 위하여 고속액체크로마토그래피(HPLC)를 사용하는 방법을 확립하였다. Aminex HPX-87C 컬럼 및 RI 검출기를 사용하여 유당, 글루코스 및 갈락토스를 12분 이내에 정량적으로 분석할 수 있었다. 컬럼 온도는 $85^{\circ}C$로 고정하였으며 이동상으로는 탈이온화된 증류수를 사용하였다. ONPG(ortho-nitrophenol-${\beta}$-D-galactopyranoside)를 이용하는 발색법의 결과와 비교하여, 고속액체크로마토그래피에 의한 유당분해효소 활성도 측정법의 타당성을 고찰하였으며, 그 결과 ONPG 방법과 고속액체크로마토그래피 방법에 의한 효소활성도 측정의 실험결과에는 큰 차이가 없었으며, 고속액체크로마토그래피를 사용하는 경우에는 420 nm에 대한 방해 작용이 있는 기질에서도 유당분해효소의 활성도를 측정할 수 있는 장점을 가짐을 확인하였다.

keywords: <TEX>${\beta}$</TEX>-Galactosidase, HPLC, ONPG, quantitative determination

Abstract

An analytical procedure is presented for the quantitative determination of lactose, glucose, and galactose in the hydrolyzate of lactose by ${\beta}$-galactosidase with high-performance liquid chromatography. An Aminex HPX-87C column at $85^{\circ}C$ and refractive index detector were used to resolve lactose, glucose, and galactose in only 12 minutes with distilled and deionized water as a mobile phase. The validity of high-performance liquid chromatography as a method for the assay of ${\beta}$-galactosidase was supported by recovery experiments and comparision of results with those by ONPG method, a spectrophotometric assay. The procedure was appropriate for determination of sugars in the enzyme reaction mixture and could by applied to analysis of ${\beta}$-galactosidase activity.

keywords: <TEX>${\beta}$</TEX>-Galactosidase, HPLC, ONPG, quantitative determination

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고속액체크로마토그래피를 이용한 유당분해효소의 활성도 측정

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